上海烜雅生物科技有限公司
店齡6年 · 企業(yè)認證 · 上海市奉賢區(qū)
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鯉春病毒熒光PCR檢測試劑盒(SVCV)
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鯉春病毒熒光PCR檢測試劑盒(SVCV)是基于熒光染料檢測的即用型 PCR 試劑盒,可以對靶片段進行實時定量PCR 分析(quantitative PCR、qPCR)。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料 DNAgreen 等所有實時定量 PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進行實時定量 PCR 反應和 HRM 分析,具有廣泛的用途。
1. 方便,用戶只需準備模板和引物既可以進行實時定量 PCR 實驗和 HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于 SYBR Green I 和 LC Green 染料的 qPCR mix 則不能同時用于上述兩種實驗。
2. 使用第三代飽和型熒光染料,信號強,不會抑制 PCR 反應。
3. 快捷,即用型的預配液使加樣操作步驟大大簡化,避免了交叉污染,降低實驗誤差。
4. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,反應的靈敏度高,特異性強。能檢測到濃度為 50 拷貝/mL 的靶分子。
鯉春病毒熒光PCR檢測試劑盒(SVCV)【規(guī)格及成分】
成分 | 100次熱封袋包裝 |
qPCR MagicMix,2× | 1 mL |
專一性引物對 | 200 μL |
陽性對照 | 50 μL |
超純水 | 1 mL |
使用手冊 | 1 份 |
鯉春病毒熒光PCR檢測試劑盒(SVCV)【運輸及保存】
低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
【產(chǎn)品圖片】
【自備試劑】
DNA 模板、引物、超純水。
【使用方法】
1. 以 20 uL 的 qPCR 反應體系為例:在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:
反應體系成分 | 20 uL 體系 | 終濃度 |
qPCR MagicMix,2× | 10 uL | 1× |
自備引物一 a | x uL | 0.1-0.5 uM |
自備引物二 a | x uL | 0.1-0.5 uM |
自備模板 a | x uL | |
自備 ROXb | 2 uL | (可以不加) |
補超純水到 | 20 uL | |
放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。
注意:
a) 通常引物濃度以 0.2 μM 可得到較好結果,可以終濃度 0.1-1.0 μM 作為設定范圍的參考;通常 DNA模板的量以10-100 ng基因組 DNA或1-10 ng cDNA為參照,因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同,可對模板進行梯度稀釋,以確定*的模板使用量。
b) ROX 校正染料:如果使用 ABI 公司的 7500,7700 和 7900 三種型號的熒光 PCR 儀器,則需用自備的 ROX 進行 Ct 值校正。對 ABI 7700 和 7900,ROX 的*濃度為 1×(即在每 20 uL 反應體系中加 2 uL 10×ROX)。對ABI 7500, ROX 的*濃度為 0.05-0.1×(每 20 uL 反應體系加 0.1-0.2uL 10×ROX;也可將 10×ROX 稀釋到 1×,然后每個反應體系加入 1-2 uL1×ROX)。ROX 會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音,因此,如果出現(xiàn)了雜峰,將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾,然后重新分析數(shù)據(jù)。
對于 iCycler IQ,MJ Opticon,MJ Chromo4,MX3000,MX4000, RotorGene3000,RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等型號的熒光PCR 儀器,ROX 不是必須的,但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。
2. 循環(huán)步驟:根據(jù)擴增子的性質(zhì)和儀器性能,從以下三個過程中任選一個進行擴增。
A:兩步快速循環(huán)法:適用于引物 Tm 值設計為 60℃的反應
酶活化 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
酶活化 | 95℃ | 10 min | 1 |
變性 退火&延伸 | 95℃ 60℃ | 15 s 1 min | 35-40 |
注意:本產(chǎn)品所采用的熱啟動酶須在預變性 95℃、10 min 條件下實現(xiàn)酶的活化。
退火溫度請以 60-64℃作為設定范圍的參考,發(fā)生非特異性反應時,可提高退火溫度。
B:三步快速循環(huán)法:適用于延伸步驟溫度高于退火步驟的 PCR(長引物 PCR)
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
酶活化 | 95℃ | 10 min | 1 |
變性 退火 延伸 | 95℃ 56-64℃ 72℃ | 10 s 30 s 32 s |
35-40 |
鯉春病毒熒光PCR檢測試劑盒(SVCV)注意:
a) 退火溫度:建議采用兩步法 PCR,退火溫度 60℃進行反應。若提高反應特異性,可提高退火溫度,以 60-64℃作為設定范圍的參考。若因使用 Tm 值較低的引物等原 因,得不到良好的實驗結果時,可嘗試進行三步法 PCR 擴增,三步法的退火溫度請以 56℃-64℃的范圍作為設定參考。延伸溫度:延伸溫度設為 72℃通常可以提高擴增效率。但是,對于 AT 含量大于 70%的擴增子來說,延伸溫度設為 60℃為宜。
C:通用循環(huán)法:這種循環(huán)方法適用于幾乎所有的熒光 PCR 儀,也適用于用快速循環(huán)法不能擴增的模版。