產(chǎn)品及特點(diǎn):

中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù)中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒保守區(qū)域設(shè)計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒成分，但不能檢測其他非中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

PCR在分子和DNA分析中有多種用途，下面就向大家介紹PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

PCR實(shí)驗(yàn)步驟

典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是：

將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；

人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；

耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

通用原則：

1， 先選擇好探針，然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。

2， 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp，理想的*能在100－150bp內(nèi)，擴(kuò)增片斷約短，有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性

3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng)，從而會導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低，及在SG分析中非特異信號。

4， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）

5， 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。

b），探針設(shè)計指導(dǎo)

1，在設(shè)計引物之前設(shè)計探針

2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。

3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在

4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應(yīng)效率，這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。

6， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個bp。

7， 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。

熒光化學(xué)物質(zhì)：

實(shí)時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：

1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的*技術(shù)平臺。

2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。

3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

大鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)免疫試劑盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris aggliin 2,AFP-L2 ELISA Kit

硫氧還蛋白氧化還原酶(xR)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣

Ratmelanocyteaibody,MCAbELISA試劑盒大鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanheparinassociatedaibody,HITELISA試劑盒人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanlisteriolysinO,LLOELISAKit人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

兔子白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒 Rabbit Leukoiene B4,LTB4 ELISA Kit

絨毛膜激素β(β-HCG)ELISA試劑盒 ，英文名： β-HCG ELISA Kit

Porcinethyroopin-releasinghormone,HELISA試劑盒豬促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanai-albuminaibody,AAAELISA試劑盒人抗白蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Humanbasicfibroblastgrowthfactor，bFGFELISAKit人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BCYEAgarBase

CAS號：77-52-1

別名：Prunol;Urson;Malol;Bungeolic acid

分子式：C??H??O?

分子量：456.7

結(jié)構(gòu)式：

Ursolic acid結(jié)構(gòu)式

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：蟾蜍他靈(Bufotalin) 英文名稱：Bufotalin產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg發(fā)貨周期：1～3天產(chǎn)品價格：詢價蟾蜍他靈(Bufotalin)是由蟾蜍種群分泌的蟾酥甾甾體激素，*糖苷類似物，被報道具有活性。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

MRS agar Lactobacillus agar acc.to DEMAN,ROGOSA and SHARPE MRS 1.10660.0500 MERCK默克 incubation media MRS agar Lactobacillus agar acc.to DEMAN,ROGOSA and SHARPE MRS 1.10660.0500 MERCK默克

疊氮化物葡萄糖液態(tài)培養(yǎng)基 250g 用于水和污水中糞性鏈球菌發(fā)酵法的推測試驗(yàn)(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。

SD大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基SDratbonemarrowmesenchymalstemcellsincompletemedium

MUGNutrientAgar
中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒圖片霉菌培養(yǎng)基現(xiàn)貨促銷250用于生物制品霉菌無菌試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)）Mould Medium

營養(yǎng)瓊脂（NA）  現(xiàn)貨促銷250細(xì)菌總數(shù)測定，細(xì)菌傳代培養(yǎng)Nutrient Agar

四號瓊脂基礎(chǔ)     現(xiàn)貨促銷250用于霍亂弧菌的選擇性分離，后加亞碲酸鉀No.4 Agar Base

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伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）   現(xiàn)貨促銷250弱選擇性培養(yǎng)基，用于腸道菌的選擇性分離Eosin-Methylene Blue Agar

三糖鐵瓊脂（TSI）   現(xiàn)貨促銷250用于腸桿菌科細(xì)菌的生化反應(yīng)篩選（葡萄糖，乳糖，蔗糖）Triple Sugar Iron Agar

XLD 瓊脂      現(xiàn)貨促銷250選擇性培養(yǎng)基，用于志賀氏菌的選擇性培養(yǎng)(FDA標(biāo)準(zhǔn))Xylose Lysine Desoxycholate Agar
熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

公司名稱 上海一研生物科技有限公司

聯(lián)系賣家 汪小姐 （QQ：3004994300）

電話 钺钹钳-钸钴钴钻钼钳钸钴

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網(wǎng)址 http://www.e-research.com.cn

地址 上海市閔行區(qū)