普利萊-膜-膠10秒快速-染色液(染膠染膜)-貨號-
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貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 |
P1601-100 | 膜-膠10秒快速染色液 (染膠染膜) | 100ml | 160元 |
P1601-250 | 膜-膠10秒快速染色液 (染膠染膜) | 250ml | 320元 |
描述:膜-膠10秒快速染色液是Dual-Dye染料的水溶液,不含有毒化學品,可對PVDF和NC膜以及聚丙烯酰胺凝膠蛋白進行快速染色。靈敏度極高,可檢測10 ng蛋白條帶,而麗春紅膜染色靈敏度為1000 ng,蘇丹黑為500 ng。本產品不使用醋酸和甲醇等有毒物質,染色劑可直接溶于水。膜染色1-2分鐘即可完畢,條帶清晰為紫褐色,背景染色極低。新鮮或陳舊的干燥膜均可染色。染色條帶清晰不退色,可直接掃描或照相。染色完全可逆,染過的膜在含0.05% Tween 20的封閉液封閉即可脫色,也可在堿性條件下數秒內完全脫色。不影響后續Western Blot。適用于硝酸纖維素膜、PVDF膜、尼龍膜。用于監測蛋白轉膜,膜染色蛋白條帶可用做Western Blot內對照。可以反復使用2-4次。
MemGel Stain染液可直接用于硝酸纖維素膜和PVDF膜快速染色。1:1稀釋后可用于聚丙烯酰胺凝膠蛋白快速染色。SDS-聚丙烯酰胺凝膠在蒸餾水或甲醇-醋酸溶液中洗滌30分鐘,浸入適量的醋酸-甲醇溶液和等量的膜-膠10秒快速染色液染色2-10分鐘即可顯示蛋白條帶。只需在甲醇-醋酸溶液脫色10分鐘即可得到背景干凈的蛋白條帶。50分鐘完成染色,靈敏度為50 ng/條帶,高于考馬斯亮蘭方法。凝膠染色液可反復使用2-4次。
規格:100ml 250ml
儲存: 室溫保存 12個月有效
操作步驟:
PVDF/NC膜染色:
1. 將PVDF膜或NC膜完全浸入染色工作液,室溫1-2分鐘,膜上出現紫褐色蛋白條帶。若蛋白豐富則10秒鐘即可達到最佳對比度。沒有蛋白條帶表明膜上沒有蛋白。
2. 取出膜,掃描或照相。如果染色背景較深,可用蒸餾水清洗背景染色,直到出現滿意的對比度。在水中停留更長時間會緩慢洗去部分染色,但條帶仍清晰可見。脫色過度可以重新染色。染過色的膜可干燥保存。
3. 將染色膜直接放入含去垢劑的封閉緩沖液中封閉(150 mM NaCl, 20 mM Tris-Cl pH7.4, 5% defat milk, 0.05% Tween 20)。1小時后膜染色將完全褪去,不影響后續Western Blot操作。另外,將膜浸入0.05-0.1N NaOH水溶液中,數十秒內即可完全清除膜染色,不影響后續Western Blot操作。
聚丙烯酰胺凝膠蛋白染色溶液配制:
配制50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液:
甲醇(或乙醇) 50 ml (自備)
冰醋酸 2 ml (自備)
蒸餾水 48 ml
室溫保存。
配制1X凝膠染色工作液:
MemGel Stain Solution 50 ml
甲醇(或乙醇) 50 ml
冰醋酸 2 ml
室溫保存。
聚丙烯酰胺凝膠蛋白染色程序:
1. SDS-聚丙烯酰胺凝膠在蒸餾水或50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液中洗滌2次,每次15~30分鐘。如果聚丙烯酰胺凝膠不含SDS,可省略洗滌步驟直接進行下面的染色。
2. 凝膠浸入1X凝膠染色工作液,2-3 min即顯示紫褐色蛋白條帶,10~20 min可達到最大染色。
3. 取出凝膠,放入50%甲醇(或乙醇)-2%醋酸溶液脫色10分鐘,直到完全洗去背景染色。
說明:
1. 如果是干燥的PVDF膜,染色前應該先用甲醇或乙醇浸泡濕潤,然后用水沖洗。
2. 膜染色可在蛋白轉移之后立即進行,或在完成Western Blot后進行。
3. 正如可用DNA或RNA瓊脂糖凝膠電泳條帶照相判斷Southern或Northern Blot加樣量一樣,膜染色條帶極其清晰并與條帶蛋白含量成正比,因而可用做Western Blot的內對照。
4. 膜染色或凝膠染色之后,染色液可以回收,裝入新容器內,室溫或4 oC保存,可反復使用2-4次。