植物原花青素(OPC)微量法檢測試劑盒
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測定步驟:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到510 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標準管:取EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。
5. 對照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
6. 測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
基本信息:
產品名稱:植物原花青素(OPC)微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規格 : 100管/48樣
貨號:GOY-01S6447
分類:氧化與抗氧化系列
測定意義:
原花色素(Oligomeric Proantho Cyanidins,OPC)是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物,廣泛存在于植物的各種器官中,具有極強的抗氧化性和清除自由基的作用,廣泛的應用于醫藥,食品,化妝品,保健品行業。
測定原理:
在酸性條件下,植物原花青素A環上的間苯二酚和間苯三酚與香草醛發生縮合反應,產生有色化合物,在500nm處有特征吸收峰,測定500nm光吸收值,可計算植物中原花青素的含量。
自備實驗用品及儀器:
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、8%鹽酸和60%乙醇。
操作步驟:
1. 樣品的準備:產品僅用于科研
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定:
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分,注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意:加入反應啟動工作液后反應即會開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明:孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測結果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算:
a. 抑制百分率的計算:
參考如下計算公式計算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對照1-A空白對照2)-(A樣品-A空白對照3)] / (A空白對照1-A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3,則可以把計算公式簡化為:
抑制百分率=(A空白對照1-A樣品) / (A空白對照1-A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯反應體系中抑制百分率為50% 時,反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據其定義的不同進行適當換算。
小鼠白介素17B(IL17B)ELISA試劑盒 ,英文名: IL17B ELISA Kit
人固酮(ALD)ELISA檢測試劑盒humanaldosterone,ALDELISAKit 96T/48T
大鼠緊密連接蛋白(Ocln)免疫試劑盒 Rat Occludin,Ocln ELISA kit
英文名稱RatMGβ2ELISAKit大鼠β2微球蛋白(MGβ2)規格:96T/48T
咖啡阿斯巴塘(aspaame)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20次
ELISAKitALD人縮酶規格:48T/96T
豬內皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thyroglobulin (TG) ELISA Kit 人甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒
GuineaPig50%complemehemolysis,CH50ELISAKit 血清總補體(CH50)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforAMS/AMY(HumanAlpha-Amylase)ELISAKit人α淀粉酶規格:48T/96T
血液谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次
Porcineai-thrombieceptor,AELISAKit豬抗凝血酶受體(A)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Human vimentin,VIM ELISA Kit 人波形蛋白Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-SRC3/KAT13B/AIB1 類固醇受體輔助活化因子-3Multi-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat anti-Mouse IgG whole serum 羊抗小鼠IgG抗血清 規格 1ml
A Beta1-40(Mouse amyloid beta peptide 1-40) ELISA Kit 小鼠β淀粉樣蛋白 96T
Neutrophil Elastase 英文名稱: 中性粒細胞彈性蛋白酶ELANE抗體 0.1ml
B4GALT7 英文名稱: 半乳糖轉移酶7亞基β1,4抗體 0.2ml
Anti-SRC3/KAT13B/AIB1 類固醇受體輔助活化因子-3Multi-class antibodies規格: 0.2ml
植物原花青素(OPC)微量法檢測試劑盒Anti-XIAP/FITC 熒光素標記X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
CX36 (Connexin-36) 間隙連接蛋白36抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
肝再生增強因子抗體 Anti-ALR 0.1ml
ZNF717 英文名稱: 鋅指蛋白717抗體 0.2ml
DBX1 英文名稱: 腦發育同源蛋白1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-FAK(Tyr407) 0酸化粘著斑激酶抗體 規格 0.1ml
CX36 (Connexin-36) 間隙連接蛋白36抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。
標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。