小鼠角膜上皮細胞
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小鼠角膜上皮細胞【MouseEye:NormalCornealEpithelialCells】
產品描述:小鼠角膜是唯一的無血管的組織,具有透明的特性和合成許多蛋白的功能。分三層細胞層,外層即是上皮細胞。角膜上皮細胞能參與先天性免疫,能感應病原體存在并發出信號從而激活角膜防御系統。角膜上皮細胞能高效表達醛脫氫酶,防止UV-和4-羥基壬烯醛對細胞造成傷害。公司提供的小鼠角膜上皮細胞,采用胰酶、中性酶消化制備而來。細胞的培養采用公司專利產品小鼠角膜上皮細胞培養試劑盒(MouseEyePrimaCell:NormalCornealEpithelialCellsCatNo.3-4498)來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞(如脂肪細胞、纖維細胞等)的污染,同時保證質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下,小鼠角膜上皮細胞傳5代仍可以保持原代細胞的分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細胞均來自新鮮組織,公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在公司生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
小鼠角膜上皮細胞 | MouseEye:NormalCornealEpithelialCells | GOY-Y6435 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到小鼠角膜上皮細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
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胎兒表皮角化細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)15-冠-5-(>97.0%(GC))質量規格:>97.0%(GC)15-Crown 5-Ether
PDE4B Others Human 人 PDE4B / DPDE4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 倍他米 21-醋酸鹽Betamethasone 21-acetate
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MERTK Others Mouse 小鼠 MERTK / Mer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 聚氧1硬脂醋酯 BRIJ 700 9002-00-9
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HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞 小鼠成纖維細胞,Y2細胞 NK-92MI(人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細胞)乙酸-2-奈酯,英文名或英文縮寫:β-Napthyl acetate,級別:高,98%,無水物,規格:5克
人急性T細胞性白血病細胞;I 2.1(CRL-2572)LoadingBuffer 1ml/5ml 國產
操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。