上海滬崢專業生產銷售鴨瘟PCR診斷試劑盒現貨，我公司供應的分子生物學試劑品類齊全，且具有優勢價格，歡迎新老客戶咨詢認購。

產品詳細信息

名稱：鴨瘟PCR診斷試劑盒

規格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【用途】 用于鴨瘟的檢測、診斷和流行病學調查。

【操作步驟】

1.RNA提取 

 1. 病料處理

   取適量肝、腦、脾、法氏囊等病料組織，于滅菌研缽充分研磨，用PBS液按照1：3稀釋成均勻乳劑，-20℃反復凍融3次以上。

2. DNA的提取

(1) 取已凍融好的病料，1000rpm離心5min，取上清200μl（或質控樣品T，200μl），加25μl TU-1和3μl TU-2，50℃水浴1～2h，期間輕柔振蕩幾次幫助裂解。

（2）加入200μl SR-I，劇烈顛倒輕搖充分混勻，70℃放置10min。

（3）冷卻后加入100μl異丙醇，充分混勻后，加入一個吸附柱（試劑盒內提供）中（吸附柱放入收集管中）10000rpm離心30秒，棄掉收集管中的廢液。

（4）加入500μl SR-Ⅱ，10000rpm離心30秒，棄廢液。

（5）加入700μl SR-Ⅲ，10000rpm離心30秒，棄廢液。

（6）再加入500μl SR-Ⅲ，10000rpm離心30秒，棄廢液。

（7）將吸附柱放回空收集管，13000rpm離心2min。

（8）取出吸附柱，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加入70μl TU-3（使用前事先預熱至65-70℃，有助于提高洗脫效果），室溫放置3～5min，12000rpm離心1min，將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心1min。

（9）洗脫液即為模板，可放在2～8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20℃。

 3 .PCR操作 

4.電泳：

    配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產物5uL混合1μl TU-7，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3μl TU-8，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結果。

【結果判定】

    在380bp 位置出現擴增帶，實驗結果為陽性

鴨瘟PCR診斷試劑盒

【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。

3. 盡量建立PCR試驗操作區，避免交叉污染。

4. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況，不予負責。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。

傳統PCR對基因的檢測只能定性，不能定量主要是由擴增產物積累的動力學所決定的：①PCR產物在擴增過程中呈指數積累，當產物增加到一定程度，產物就停止了指數積累。不同起始模板，其指數增長期所用的循環是不同的，因此，不同數量基因的樣品在同一循環次數中積累的產物不能作為樣品基因定量的依據；②PCR產物積累到一定程度就不能再增加，再進入平臺期。為了擴大PCR檢出的靈敏度通常要增加循環次數，循環次數增加使得樣品目的基因含量高的反應管已進入平臺期，終產物量并不代表樣品目的基因含量；③PCR反應的管間擴增效率差異總是存在的，既然PCR產物呈指數增長，由擴增效率差異引起的產物擴增差異也呈指數積累，增加循環次數勢必增加終產物的差異，而減少循環次數又降低了檢測的靈敏度。FQ-PCR采用實時檢測，使所有含有不同數量的目的基因均在同一條件（達到熒光閾值）下進行分析，因而更具有可比性。而且，這一條件處于擴增產物指數積累初期，合成產物所需的dNTP、酶、離子均處于飽和的*狀態，所以FQ-PCR循環參數與起始模板間有良好的線性關系（相關系數＞0.95），實現了極為精確的基因定量檢測。